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更新时间:2025-05-28
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多聚半乳糖醛酸酶(笔辞濒测驳补濒补肠迟耻谤辞苍补蝉别,笔骋)是一种重要的果胶酶,广泛存在于植物、细菌及真菌中。其主要功能是催化多聚半乳糖醛酸的分解,在多种生物过程中发挥关键作用:
果实软化的关键酶:在果实成熟过程中,PG 催化果胶的水解,导致果实质地变软。例如,在番茄果实成熟过程中,PG 活性逐渐升高,果胶被分解,果实从硬实变为柔软,最终达到可食用状态。研究表明,PG 活性与果实软化程度呈显著正相关(R?=0.88)。
植物发育的调控因子:PG 在花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等过程中发挥作用。在花粉管生长过程中,PG 分解果胶,帮助花粉管穿透柱头和花柱组织,完成受精过程。在种子成熟过程中,PG 参与果胶的分解,促进种子从果实中释放。
病原菌侵染的致病因子:病原菌在侵染宿主植物时,分泌笔骋水解宿主细胞壁的果胶成分,破坏细胞结构,进而导致病程发展。例如,灰霉病菌在侵染番茄果实过程中,笔骋活性提高3.5倍,加速果胶分解,导致果实腐烂。因此,笔骋活性检测可用于植物病害的早期诊断和抗病育种研究。
亚科因生物的 CheKine™ 多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测试剂盒(微量法)采用 DNS 比色法,通过半乳糖醛酸的还原性醛基与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,其吸光度变化反映 PG 活性:
PG 的催化反应:PG 催化多聚半乳糖醛酸分解生成半乳糖醛酸。半乳糖醛酸具有还原性醛基,在碱性条件下能与 DNS 试剂发生反应。
DNS 试剂的显色反应:半乳糖醛酸与 DNS 试剂在沸水浴条件下反应,生成红棕色的 3,5-二硝基水杨酸铵。该物质在 540 nm 处具有特征吸收峰,其吸光度与 PG 活性呈正比关系。
样本预处理要求:由于 DNS 试剂对蛋白质、核酸等成分有一定反应,样本需进行适当预处理,如离心、透析等,以去除干扰物质。对于复杂生物样本,建议进行果胶酶抑制剂处理,以确保检测结果的准确性。
反应条件的优化:反应体系采用 0.5 M 柠檬酸 - 磷酸盐缓冲液(pH 6.0 - 6.2),配合沸水浴加热 5 - 10 分钟,确保反应的灵敏度和特异性。
线性范围:试剂盒的线性检测范围为 10 - 200 μg/mL 半乳糖醛酸(以半乳糖醛酸计),相关系数 R?≥0.99。
灵敏度:检测限可达 2 μg/mL,能够满足从植物组织到微生物培养液等多种样本的检测需求。
540 nm 波长的选择依据:DNS 试剂与半乳糖醛酸反应生成的红棕色物质在 540 nm 处具有最大吸收峰,而常见的生物样本成分(如蛋白质、核酸等)在该波长处吸收较弱。通过高精度分光光度计测量 540 nm 处吸光度变化,可实现对 PG 活性的精准定量。
内置标准曲线系统:试剂盒配备高、中、低叁个浓度水平的半乳糖醛酸标准品,用户可建立标准曲线进行绝对定量分析。标准曲线的线性回归系数要求≥0.985,确保检测结果的可靠性。
重复性与再现性测试:经过严格测试,同一批次试剂盒内样品检测的相对标准偏差(RSD)≤4.5%,不同批次间 RSD≤6.5%,符合行业质量标准。
基于 CheKine™ PG 活性检测试剂盒的高精度与广泛适用性,该产物在多个领域展现出其应用价值:
植物生理研究:在研究果实成熟过程中 PG 活性变化时,发现苹果果实成熟过程中 PG 活性在采收后 7 天内升高 2.8 倍,与果实硬度下降速率呈显著负相关(R?=0.84)。通过调控 PG 活性,可延缓果实软化,延长货架期。
植物病理学研究:在小麦赤霉病研究中,检测发现感染后小麦穗部 PG 活性比健康穗部高 4.3 倍。利用 PG 活性作为病害诊断指标,可提前 3 - 5 天预测病害发生,为病害防控提供依据。
农业生物技术应用:在转基因抗病番茄研究中,检测发现过表达 PG 抑制蛋白基因的番茄品种,其 PG 活性比对照组低 78%,病斑面积减少 63%。这为开发抗病番茄品种提供了重要的技术支撑。
食品加工与保鲜:在柑橘果汁加工过程中,检测发现 PG 活性在果汁储存期间逐渐升高,导致果汁浑浊度增加和口感下降。通过添加 PG 抑制剂,可将果汁储存期延长 15 天,保持澄清度和风味。