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一、什么是 GSH?

??GSH(Glutathione，谷胱甘肽)?? 是一种由 ??谷氨酸(Glutamate)、半胱氨酸(Cysteine)和甘氨酸(Glycine)?? 组成的三肽，是生物体内最重要的??非酶抗氧化剂??之一，广泛存在于几乎所有细胞中，尤其在肝脏、肾脏等代谢活跃的组织中含量丰富。

GSH 的主要功能包括：

1.??抗氧化作用：??

•直接清除自由基(如活性氧 ROS、活性氮 RNS);

&产耻濒濒;维持细胞内氧化还原平衡，保护细胞免受氧化损伤;

•作为其他抗氧化剂(如维生素 C、E)再生的辅助因子。

2.??解毒作用：??

&产耻濒濒;与药物、重金属、环境毒素等结合，形成可排泄的复合物，发挥解毒功能;

•依赖 GSH 的解毒酶(如谷胱甘肽过氧化物酶 GPx、谷胱甘肽-S-转移酶 GST)在排毒中起关键作用。

3.??调节细胞信号与增殖：??

&产耻濒濒;参与调控细胞氧化还原敏感的信号通路，影响细胞生长、凋亡与免疫。

二、为什么要检测 GSH?

在科研和临床中，检测 GSH 水平具有重要意义：

? ??在基础科研中：??

•研究??氧化应激(Oxidative Stress)??与疾病(如癌症、神经退行性疾病、心血管疾病、糖尿病等)的关系;

&产耻濒濒;探讨??抗氧化防御系统??的功能状态;

&产耻濒濒;评估药物、毒物、辐射、环境因素对细胞或组织氧化还原状态的影响;

•研究细胞代谢、线粒体功能、炎症反应等过程中的 GSH 动态变化。

? ??在药物研发与毒性评价中：??

•评价候选药物的??抗氧化 / 促氧化作用??;

&产耻濒濒;观察化学物质或药物对细胞或组织的??毒性(尤其是肝毒性、氧化损伤)??;

&产耻濒濒;用于??保健品、营养补充剂、功能性食品??的功效评估。

? ??在临床与医学检验中：??

&产耻濒濒;辅助诊断某些??代谢性疾病、肝病、神经疾病、免疫疾病??;

&产耻濒濒;评估机体的??抗氧化能力与氧化应激水平??。

三、GSH 的存在形式

在细胞内，GSH 主要以两种形式存在：

1.??还原型谷胱甘肽(骋厂贬)：??

&产耻濒濒;具有抗氧化活性，是细胞中最主要的形式;

•通过提供还原力清除自由基，自身被氧化为 GSSG。

2.??氧化型谷胱甘肽(GSSG，Glutathione Disulfide)：??

•是 GSH 被氧化后的产物，抗氧化能力大幅下降;

•细胞中 GSSG 比例升高是氧化应激的重要标志。

? ??科研中常检测：??

•??总谷胱甘肽(Total GSH = GSH + GSSG)??

•??还原型 GSH??

•??GSH/GSSG 比值(衡量细胞氧化还原状态的关键指标)??

四、骋厂贬检测试剂盒的常见检测原理

目前市面上常见的 ??GSH检测试剂盒?? 主要基于以下几种方法：

??1. DTNB(Ellman 试剂)法 / 5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸) 法??

? 原理：

•??DTNB(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid))?? 可与 GSH 中的巯基(-SH)反应，生成 ??黄色的 2-硝基-5-硫代苯甲酸(TNB)??，在 412 nm 处有强吸收峰;

•通过测定吸光度变化，定量 GSH 含量;

•若样品中存在 GSSG，通常需先用 ??还原剂(如 NADPH + GR，谷胱甘肽还原酶)?? 将其转化为 GSH 后再检测(即检测 Total GSH)。

? 优点：

&产耻濒濒;操作相对简单，灵敏度高;

&产耻濒濒;适用于细胞裂解液、组织匀浆、血液等生物样本;

•是目前经典的 GSH 定量方法之一。

? 局限：

•易受其他含巯基物质(如半胱氨酸、蛋白质中的 SH 基团)干扰;

&产耻濒濒;需注意样本处理(如去蛋白)以减少干扰。

? ??常见试剂盒名称：??

•GSH/GSSG 检测试剂盒(DTNB 法)

•Total Glutathione Assay Kit

•Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit

??2. 荧光探针法(如利用 GSH 特异性荧光染料)??

? 原理：

•使用 ??GSH 特异性的荧光探针??(如 ThiolTracker™ Violet、Monobromobimane [mBrB] 等)，与 GSH 反应生成荧光产物;

•通过荧光强度定量 GSH 含量，可用荧光酶标仪或流式细胞仪检测。

? 优点：

&产耻濒濒;灵敏度高，适合低丰度样本;

&产耻濒濒;可进行细胞内实时检测(如活细胞荧光成像)。

? 局限：

&产耻濒濒;荧光探针可能与其他巯基化合物交叉反应;

&产耻濒濒;需要特定仪器(荧光或流式)。

??3. 酶循环放大法(Enzymatic Recycling Assay)??

? 原理：

•利用 ??谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)?? 等酶类，通过循环反应放大信号;

•与 DTNB 联用，提高检测灵敏度和特异性;

&产耻濒濒;是许多商品化试剂盒采用的优化方法。

? 优点：

&产耻濒濒;灵敏度更高，检测限更低;

&产耻濒濒;适合微量样本(如少量细胞或组织)。

??4. 比色法 / 微量法(适用于 96 孔板高通量检测)??

•很多商品化试剂盒将上述原理(如 DTNB 法)优化为可在 ??96 孔板?? 上进行的比色检测，便于高通量筛选和自动化仪器读取。

五、骋厂贬检测试剂盒的常见类型总结

六、如何选择合适的 GSH检测试剂盒?

选择 GSH检测试剂盒时，建议考虑以下因素：

1. ??检测目标：??

•只检测 ??GSH???还是需要同时检测 ??GSSG?? 和计算 ??GSH/GSSG 比值???

•是否关注 ??总谷胱甘肽(GSH + GSSG)???

2. ??样本类型：??

&产耻濒濒;细胞裂解液、组织匀浆、血液/血清、尿液、培养基上清?

•是否为 ??活细胞检测??(如荧光探针法)?

3. ??检测平台：??

•是否使用 ??酶标仪(比色法)???

•是否需要 ??荧光检测(如荧光酶标仪)?? 或 ??流式细胞仪???

•是否需要适配 ??96 孔板高通量检测???

4. ??灵敏度与样本量：??

•样本量少(如少量细胞)时，选择 ??高灵敏度酶循环法??;

•样本量充足时可选择常规 DTNB 法。

5. ??是否需要去除干扰：??

•蛋白质或其他含巯基物质可能干扰，有些试剂盒提供 ??去蛋白步骤?? 或 ??专用缓冲液??。

七、使用 GSH检测试剂盒的注意事项

1.??样本处理：??

•细胞样本：收集后迅速冷冻或立即裂解，避免 GSH 氧化为 GSSG;

&产耻濒濒;血清/血浆：避免溶血，因血红蛋白中的巯基会干扰检测;

&产耻濒濒;建议设置空白对照、标准曲线和阳性/阴性对照。

2.??避免氧化：??

•GSH 易被空气氧化为 GSSG，操作时尽量避光、低温，操作迅速;

•推荐使用 ??抗氧化剂处理?? 或 ??快速检测流程??。

3.??标准曲线：??

•大多数试剂盒提供 GSH 标准品，需建立标准曲线进行定量分析。

4.??试剂保存：??

•DTNB、NADPH 等试剂通常对光敏感，需避光低温保存;

•酶类(如 GR)需在 -20℃ 保存，避免反复冻融。

八、总结

??骋厂贬??是重要的内源性抗氧化剂，维持细胞氧化还原平衡。

??检测意义：??氧化应激、疾病机制、药物毒性、代谢研究等方向的关键指标

??存在形式??：还原型 GSH(活性)、氧化型 GSSG;常检测 GSH、总 GSH、GSH/GSSG 比值

??主流方法：??DTNB 法(比色)、酶循环法、荧光探针法、比色高通量法

??试剂盒选择??：根据样本类型、检测目标(GSH / GSSG / 比值)、平台(酶标仪/荧光等)选择

??关键点：??避免氧化、控制样本处理时间、设立对照、使用标准曲线

如你正在开展与??氧化应激、细胞代谢、药物毒性、抗氧化研究??相关的实验，检测 GSH 水平将是非常关键的一步。