天美星空乌鸦mv

一、确定实验需求维度

在列表页浏览之前，先写下叁个必须回答的问题：

• 研究是急性炎症模型还是长期屏障功能评估？

• 是否需要荧光标记或基因编辑兼容性？

• 预计细胞传代次数上限是多少？

这叁个问题的答案决定了后续所有选型参数，而不是反过来让产物手册替你“规划实验"。

二、查看细胞来源与批次溯源

真正的永生化系应附带完整的原代分离记录、SV40 Large T 和 hTERT 双基因整合的 Southern blot 图以及最近一次 STR 鉴定报告。批次溯源编号需能在原研机构数据库中检索到，避免“实验室二次永生化"带来的变异噪声。若供应商只能提供“冻存前形态图"，直接跳过。

叁、验证永生化元件的表达方式

SV40 与 hTERT 的共表达效率决定细胞能否在 50 代以后仍保持肺微血管内皮的关键表型。索取 qPCR 数据：

• SV40 Large T / β-actin ≥ 0.8

• hTERT / β-actin ≥ 1.2

低于此阈值，细胞会在 30 代左右出现接触抑制丧失、紧密连接蛋白下调，导致 TEER 值跳水。

四、功能检测金标准

索取以下叁份报告，缺一不可：

1. Dil-Ac-LDL 摄取率 ≥ 95%，证明内皮身份。

2. 跨内皮电阻 TEER 值 ≥ 30 Ω·cm?，确认屏障完整。

3. LPS 刺激后 ICAM-1 上调 ≥ 10 倍，验证炎症反应通路完好。

供应商若只提供“形态学鉴定"，意味着上述功能已部分丢失。

五、冻存密度与复苏存活率

高密度冻存（≥ 3 × 10? cells/mL）可显著降低 DMSO 毒性。索取最近三批次复苏存活率原始数据，要求：

• 24 h 贴壁率 ≥ 85%

• 48 h 倍增时间 ≤ 28 h

低于此标准，实验进度会被迫拉长，诱导额外表型漂移。

六、运输方案与到货检验

干冰运输需保持 -78 °C 以下，到货立即拍照记录干冰余量。开箱后立刻做台盼蓝计数，现场计算存活率并邮件反馈供应商。存活率 < 90% 可直接要求补发，多数正规品牌 24 h 内即可发出替换批次。

七、配套培养体系兼容清单

确认随细胞附赠的培养基配方：

• FBS 批号与浓度（通常 2% 即可维持生长，过高会诱导自发分化）

• 是否已预添加 bFGF 和 heparin（缺一不可，缺失会导致细胞拉长、丧失鹅卵石形态）

• 抗生素浓度（Pen-Strep 建议 ≤ 50 IU/mL，更高会抑制紧密连接蛋白表达）

八、合同与售后条款

在采购合同里写明：

• 30 代以内出现表型漂移可全额退款

• 提供每年一次的免费 STR 复核

• 技术咨询响应时间 ≤ 12 h

把售后条款写进合同，而不是依赖口头承诺，是避免后期扯皮的办法。